常用的动物提取物的提取方法分为物理方法和化学方法,下面来一一进行介绍:
1、物理方法
1.1机械方法:主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
a 高压匀浆法
高压匀浆过程中,细胞受到剪切、碰撞、压力骤变等作用而被破碎,释放出目的蛋白,这是一种常用的破碎方法。对于细胞膜结合的蛋白质,一般需要多次破碎。活性蛋白的提取,操作应尽可能在低温下进行,以免因为产生太多的热量而导致目的蛋白的失活。
b高速珠磨法
高速珠磨法是很有效的破碎方法,少量样品可以在聚乙烯试管内进行,较多的样品需高速珠磨机。对于一些活性蛋白,珠磨机的搅拌速度须限制在合时的范围内以减少产生的热量,避免造成蛋白质的失活。对于破碎对象,最好先预冷后再进行细胞破碎,玻璃珠在使用前,通常也需清洗和预冷却。
1.2 非机械方法:通过各种物理因素的作用,使组织细胞破碎的方法。
a冷热变替法
将材料投入沸水中,于90℃左右维持数分钟,立即置于冰浴中使之迅速冷却,绝大部分细胞被破坏。
b超声波法
暴露于9~10千周声波或10~500千周超声波所产生的机械振动。应用超声波处理时应注意避免溶液中气泡的存在。处理一些超声波敏感的蛋白质酶时宜慎重。 超声波破碎在实验室规模应用较普遍, 处理少量样品时操作简便, 液量损失少, 但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。
c冻融法
于冷藏库或干冰反复于零下15~20℃使之冻固,然后缓慢地融解,如此反复操作,使大部分细胞及细胞内颗粒破坏。由于渗透压的变化,使结合水冻结产生组织的变性,冰片将细胞膜破碎,使蛋白质可溶化,成为粘稠的浓溶液,但脂蛋白冻结变性。
2、化学及生物化学方法
2.1酶解法
酶解法是利用酶的作用将动植物细胞壁或细胞膜或对某些成分水解或降解,使有效成分充分地暴露出来,溶解、混悬、胶溶于溶剂中,以提高活性成分的提取率,同时,生物酶作用于药材中的某些成分发生降解、水解,生成可被吸收入血的药效物质。
2.2有机溶媒法
粉碎后的新鲜材料在0℃以下加入5~10倍量的丙酮,迅速搅拌均匀,可破碎细胞膜,破坏蛋白质与脂质的结合。蛋白质一般不变性,被脱脂和脱水成为干燥粉末。用少量乙醚洗,经滤纸干燥,如脱氢酶等可保存数月不失去活性。
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